白介素27ELISA试剂盒是一种用于定量检测样本中IL-27浓度的试剂盒,基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。其原理是将特异性抗体包被在微孔板(或酶标板)上,加入标准品或待测样本,样本中的IL-27会与包被抗体结合。然后加入生物素化抗体,该抗体会与已结合的IL-27发生特异性结合。接着加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合。最后加入显色剂底物TMB,若反应孔中存在IL-27,则HRP会使无色TMB变成蓝色物质,加入终止液后反应孔会变成黄色。在特定波长下测定反应孔的吸光度(OD值),样本中的IL-27浓度与OD值成正比,通过绘制标准曲线即可计算出样本中IL-27的浓度。
一、温度控制
核心组分:如标准品、检测溶液A/B、96孔板等,需立即保存于-20℃或更低的温度下,以防止蛋白质变性或降解。
其他试剂:如洗涤液、终止液等,建议保存在4℃的冰箱中,避免冷冻。
特殊说明:严禁冷冻含甘油或酶标抗体的组分,这可能导致蛋白变性,影响试剂性能。
二、避光防潮
避光保存:所有试剂需避光保存,尤其是HRP标记物和TMB底物。这些试剂对光敏感,长时间暴露于光线下可能导致其活性降低或失效。建议使用铝箔包裹或棕色瓶存放。
防潮处理:确保试剂容器密封良好,防止湿气进入。湿气可能导致试剂降解和损坏,影响实验结果。在南方高湿地区,建议在试剂盒保存罐内放置变色硅胶干燥剂,当指示剂由蓝变粉时需立即更换。
三、特殊成分特殊保存
标准品:部分标准品可能需要避光或在-20℃以下保存,应严格按说明书要求操作。
分装保存:对于频繁使用的试剂盒,建议将酶标物按单次用量分装至0.5mL离心管中,使用封口膜密封管口后置于-20℃避光保存。分装前需对工作台进行紫外线消毒,操作全程佩戴低温防护手套,避免反复冻融导致蛋白聚合。
四、确保包装完整
保存前要确认试剂盒包装完好无损,若包装有破损、密封不严,应及时更换包装或采取密封措施,防止试剂污染或变质。
五、使用前准备
回温处理:实验前,将试剂盒从冷藏环境中取出,在室温下平衡15-30分钟后再使用。这有助于确保试剂温度与室温一致,避免因温度差异影响实验结果。
梯度解冻:对于冷冻保存的试剂,应采用梯度解冻的方法。例如,将分装管置于4℃冰箱梯度解冻12小时,禁止室温快速解冻。解冻后的酶标物需在24小时内使用完毕,未用完部分应当废弃。
