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更新时间:2024-11-05
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产品名称:小鼠椎间盘纤维环细胞
组织来源:椎间盘组织
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传3-5代左右
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞简介:
小鼠椎间盘纤维环分离自椎间盘组织;椎间盘是位于脊柱两椎体之间,由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板,是透明软骨复盖于椎体上,下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成,位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠,使纤维环成为坚实的组织,能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚,而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带,后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3,其外层的细胞呈梭型,主要属于纤维细胞,内层细胞呈圆形,主要属于软骨细胞。在培养的情况下,用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现,它们的核较圆,核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多,为椭圆形,有的可看到双层单位膜,由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒,纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛,保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少,纤维环的生物性能就会减弱,椎间盘开始退变。
方法简介:
公司实验室分离的小鼠椎间盘纤维环采用胶原酶-联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的小鼠椎间盘纤维环经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
公司正在出售的产品:
土壤无机0(S-PHOS)含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
土壤总0/有机0/无机0含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
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宫颈癌原癌基因2抗体
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IFNA4 Protein Human 重组人 IFNα4 / IFNa4 / Interferon alpha-4 蛋白
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C-Peptide( C-PEP 0.5mgC-Peptide( C-PEP ) C-肽(C肽)
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PDCD1LG2重组大鼠 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白 (Fc 标签) Protein
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LGALS8重组人 Galectin-8 / LGALS8 蛋白 (GST 标签) Protein
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Mouse 6 keto prostaglandin F1a (6-keto-PGF1a) ELISA Kit 小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)试剂盒
ELISA 小鼠睫状神经营养因子(mouse CF) 进口分装
CLIAKitforLF/LTF(RabbitLactoferrin)ELISAKit兔乳铁传递蛋白/乳铁蛋白
通用型HRP-DAB底物显色试剂盒10次
ELISAKitMMP11基质金属蛋白酶11