服务热线
021-59989018
产品简介:
产品型号:
厂商性质:经销商
访问量:61
更新时间:2024-10-29
大鼠胚胎干细胞
商品属性:
组织来源 | 产品规格 | 细胞形态 | 货号 |
囊胚 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 短梭形、多角形 | YS-01X7741 |
细胞简介:
大鼠胚胎干分离自囊胚胚胎组织;胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESCs,简称ES、EK或ESC细胞)是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境,ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。进一步说,胚胎干细胞(ES细胞)是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性,能分化出成体动物的所有组织和器官,包括生殖细胞。ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构,细胞核大,有一个或几个核仁,胞核中多为常染色质,胞质胞浆少,结构简单。体外培养时,细胞排列紧密,呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色,ES细胞呈棕红色,而周围的成纤维细胞呈淡黄色。细胞克隆和周围存在明显界限,形成的克隆细胞彼此界限不清,细胞表面有折光较强的脂状小滴。细胞克隆形态多样,多数呈岛状或巢状。小鼠ES细胞的直径7 微米~18 微米,猪、牛、羊ES细胞的颜色较深,直径12 微米~18 微米。胚胎干细胞与普通细胞有显著差别,有其特定的生长特性和特定的标志,例如碱性磷酸酶活性非常高,带有胚胎阶段特异性表面抗原( Stage- specific embryonic antigens,SSEA),人类胚胎干细胞还带有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等标志,这些特性和标志均可以用于对胚胎干细胞进行鉴定,除此之外,胚胎干细胞还可以在体外传代,并保持正常核型。在体外培养体系中加入分化抑制剂如白血病抑制因子( Leukaemia inhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层(MEF)上培养时,胚胎干细胞都能呈克隆性增殖,长期保持核型正常和稳定,冻存解冻也不影响不分化的特性。另外,胚胎干细胞还表现岀高水平端粒酶活性,目前证明端粒酶与细胞衰老密切相关,多数成熟细胞的端粒酶活性都很低。这些都是胚胎干细胞与成熟细胞不同的重要特点,也可能是其复制生命期限远比体细胞长的原因。
方法简介:
公司实验室分离的大鼠胚胎干采用分离囊胚组织,去除胚胎透明带、使用特制专用培养基筛选培养,消化传代纯化制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的大鼠胚胎干经Oct-4免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:
包被条件 明胶(0.1%)
培养基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次;
生长特性 贴壁
细胞形态 短梭形、多角形
传代特性 可传5-8代左右
消化液 0.025%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞传代及冻存:
细胞传代步骤 | 细胞冻存步骤 |
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,细胞变圆脱落后,加入2ml培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
原代细胞的培养方法一般有以下4种:
① 组织块培养法
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
② 消化培养法
③ 悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
④器官培养
器官培养是指从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养,器官培养可保持器官组织的相对完整性,可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。
公司正在出售的产品:
小鼠纤维连接蛋白 英文名称: Fibronectin 规格: 英文缩写: FN
FMS样酪酸激酶 英文名称: Fms-related tyrosine kinase-3 规格: 英文缩写: Flt3
小鼠Flt3配体 英文名称: Fms-related tyrosine kinase-3 Ligand 规格: 英文缩写: Flt3 Ligand
小鼠纤维连接蛋白 英文名称: fibronecti 规格: 英文缩写: FN
小鼠胃泌酸调节素(OXM)试剂盒 96T/48T
Human phosphoenolpyruvate carboxykinase (PCK) ELISA Kit 人0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)试剂盒
Humanalkalinephosphatase,ALPELISAKit 人碱性0酸酶(ALP)试剂盒 96T/48T 进口分装
ChickenIerleukin1,IL-1试剂盒鸡白介素1(IL-1)试剂盒规格:96T/48T
载玻片细胞ERK蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次
MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)试剂盒规格:96T/48T
PE标记人CD18单克隆抗体
酪激酶A/B/C重组兔单克隆抗体
PTPN11重组小鼠 SHP2 / PTPN11 蛋白 Protein
泛素(Ub)重组蛋白 Recombinant Ubiquitin (Ub)
PRKAR1A重组人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 Protein
CDK16 Protein Human 重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签)
EFNA5 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白
转铁蛋白受体(TFR)天然蛋白 Native Transferrin Receptor (TFR)
CDK16 Protein Human 重组人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 标签)
CD6重组小鼠 CD6 / TP120 蛋白 Protein
PRLR Protein Rat 重组大鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白
CCL1重组人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 Protein
大鼠胚胎干细胞兔子内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 试剂盒
People leils binding type AFP / AFP varia 2 (AFP-L2) ELISA kit E 人小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)试剂盒E
Humanpolyimmunoglobulieceptor,poly-IgRELISAKit 人多免疫球蛋白受体(poly-IgR)试剂盒 96T/48T 进口分装
Humandynorphin,Dyn试剂盒人强啡肽(Dyn)试剂盒规格:96T/48T
组织P38a激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次
Humanperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)试剂盒规格:96T/48T
原代细胞的培养条件:
一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养
1、细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性;
2、细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L;
3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养;
4、 胎牛血清浓度为10%-80%
5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养;
6、在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮;
7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状,应将原代细胞换液;
8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时,应将细胞悬液经低速离心后换液。
二、悬浮细胞培养
1、原代培养时要尽量去除红细胞;
2、短期培养,可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行;
3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内,进行分瓶试验;
4、长期培养时,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长;
5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次;
6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。