BW25113 感受态细胞

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更新时间：2020-09-08

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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
rabbit Prostaglandin E2, PG-E2 Elisa KitTG100-115Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Prostaglandin E1, PGE1 Elisa Kit 盐酸地芬尼多（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Prostaglandin E1, PGE1 Elisa Kit 盐酸乌拉地尔Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Corticosterone, CORT Elisa Kit盐酸乌拉地尔（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Corticosterone, CORT Elisa Kit盐酸氟桂利嗪（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

Rabbit Cortisol Elisa Kit 盐酸氟桂利嗪Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

Rabbit Cortisol Elisa Kit 盐酸非索非那定（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit brain natriuretic peptide, BNP Elisa Kit盐酸非索非那定Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit brain natriuretic peptide, BNP Elisa Kit尼扎替丁（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Endostatin, ES Elisa Kit 醋谷胺/乙酰谷酰胺（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Endostatin, ES Elisa Kit 蒙脱石（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Endothelin 1, ET-1 Elisa Kit 佛手柑素;香柠檬素;佛手柑亭;香柠檬亭（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Endothelin 1, ET-1 Elisa Kit 盐酸罗哌卡因（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Immunoglobulin G, IgG Elisa Kit番石榴苷（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T

rabbit Immunoglobulin G, IgG Elisa Kit恩曲他滨（标准品）Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：96T

rabbit Immunoglobulin E, IgE Elisa Kit恩曲他滨Rabbit/兔Elisa试剂盒规格：48T
BW25113 感受态细胞CDK2AP2  细胞周期素依赖激酶2相关蛋白2一抗    * 0.2ml Span* 60

CEACAM21  癌胚抗原相关细胞粘附分子21一抗    * 0.2ml Titanium (IV) oxide

CDKAL1  周期素依赖性激酶5调节蛋白1样蛋白1一抗    * 0.2ml Triton X405

CEACAM16/CEAL2  癌胚抗原相关细胞粘附分子16一抗    * 0.2ml Urinary trypsin inhibitor fragment

CEACAM19/CEAL1  癌胚抗原相关细胞粘附分子19一抗    * 0.2ml Zinc oxide

ADCK5  ADCK5蛋白一抗    * 0.2ml 4(5)Methylimidazole

ITGB1BP2/CHORDC3  整合素β1结合蛋白2一抗    * 0.2ml Aluminum hydroxide

CLDND2  膜蛋白CLDND2一抗    * 0.2ml Ammonium phosphate, tribasic , trihydrate
操作方法：
1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13 h。
基本共性:
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜，即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器—核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内，核糖体，是蛋白质合成的机器，在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
6、能进行自我增殖和遗传
7、新陈代谢
8、细胞都具有运动性，包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
产品仅用于科研采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。