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原来这就是活化素Aelisa试剂盒的测定步骤

日期:2022-03-29浏览:163次

 
  活化素Aelisa试剂盒检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  活化素Aelisa试剂盒的测定步骤:
  1、加样
  ①除包被外都需45度加样
  ②加样体积要准确
  ③管底加样,不能加在管壁上
  ④加样时不能产生气泡
  2、温浴
  ①加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温度的水浴箱。
  ②各ELISA板不应叠在一起。
  ③为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的金属湿盒中。
  ④加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
  3、洗涤
  ①洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。
  ②目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。
  4、读板
  ①阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般可采用目视比色。
  ②如用酶标仪测定结果,准确性决定于ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质量和软件的算法。

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