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白介素27ELISA试剂盒的详细操作步骤是怎样的!

日期:2020-10-27浏览:112次

   白介素27ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素水平。用纯化的人白介素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素,再与HRP标记的白介素抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
  白介素27ELISA试剂盒的操作步骤:
  1、标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/L,15 ng/L)。
  2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、温育:用封板膜封板后置38℃温育30分钟。
  4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
  5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  7、温育:操作同3。
  8、洗涤:操作同5。
  9、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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