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活化素Aelisa试剂盒在使用方面有以下事项

日期:2024-10-26浏览:114次

  活化素Aelisa试剂盒检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  活化素Aelisa试剂盒其使用事项主要包括以下几个方面:
  1、试剂准备与处理:
  试剂盒从冷藏环境中取出后,应在室温平衡15-30分钟后方可使用。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,但洗涤时不影响结果。
  2、样品与标准品的处理:
  根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50μl于反应孔内。
  若样本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔最高孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定,计算时最后乘以总稀释倍数。
  3、加样操作:
  各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  4、孵育与洗涤:
  在加入生物素标记的抗体、亲和链酶素-HRP等试剂后,需盖上膜板,轻轻振荡混匀,并在规定的温度下温育相应的时间。
  甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡一定时间后甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复洗涤操作多次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数可适当增加。
  5、底物与终止反应:
  每孔加入底物A、B各50μl,轻轻振荡混匀,在37℃温育10分钟,期间避免光照。
  取出酶标板,迅速加入终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  6、结果判定与记录:
  在450nm波长处测定各孔的OD值,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
  所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  7、试剂管理与保存:
  本试剂不同批号组分不得混用。如需代测或者样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间避免反复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。

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