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关于17羟孕酮elisa试剂盒,你了解多少呢?

日期:2024-05-27浏览:66次

  17羟孕酮elisa试剂盒是用于定量测量样本中17羟孕酮(17-OHP)含量的实验工具。采用了竞争性抑制酶免疫分析技术或双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法。在检测过程中,特异性抗体与样本中的17-OHP发生竞争性结合反应,通过酶标仪测量反应后的颜色深浅来间接反映样本中17-OHP的浓度。
  下面将详细探讨17羟孕酮elisa试剂盒其作用、原理及操作方法:
  1、检测原理
  双抗体夹心法:该试剂盒采用双抗体夹心法进行检测。首先将特异性的17羟孕酮抗体包被在微孔板上,然后依次加入待测标本和标准品。如果样本中含有17羟孕酮,它将与包被抗体结合。
  HRP标记的检测抗体:接着加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,这种抗体也会与17羟孕酮结合,形成“抗体-抗原-抗体-HRP”复合物。
  底物显色:经过温育和彻d洗涤后,加入TMB底物。在HRP的催化下,TMB转化为蓝色,最终在酸性条件下变为黄色。颜色的深浅与样品中的17羟孕酮含量呈正相关。
  2、样品处理
  血清和血浆:使用无热原和内毒素的试管收集血液,并通过离心分离出血清或使用抗凝剂获得血浆。细胞上清液和组织匀浆也需通过离心去除颗粒和聚合物。
  保存条件:如果不立即进行检测,应将样本分装并冻存于-20℃,避免反复冻融,并在室温下解冻以确保样品均匀。
  3、操作步骤
  试剂准备:将试剂盒和所有试剂在室温下平衡20分钟。准备洗涤缓冲液、底物A和B等。
  加样和温育:在设置好标准品孔和样本孔后,加入相应的标准品和样本,然后加入HRP标记的检测抗体,封板后在37℃下温育60分钟。
  洗板和显色:温育后弃去液体,洗板五次,然后加入底物A和B,再次在37℃下避光孵育15分钟。
  终止反应和读数:加入终止液后,在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),根据标准曲线计算样本浓度。
  4、结果判断
  绘制标准曲线:利用Excel或其他软件,以标准品浓度为横坐标,对应OD值为纵坐标,绘制标准品线性回归曲线。根据曲线方程计算各样本的浓度值。

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