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PCR检测试剂盒的使用技巧有哪些呢?

日期:2022-03-28浏览:144次

 
  PCR检测试剂盒引物是PCR特异性反应的关键,PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
  PCR检测试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测,可用于检测各种待检标本(如血液、粪便、食物、生物材料等)中所感染的特定细菌或病毒的某一特定基因,进而确定该细菌或病毒的感染/污染状态。试剂盒中所含引物能特异性扩增该细菌或者病毒的保守区域,不会交叉扩增细胞基因组。与传统的选择性培养基培养检测方法和免疫血清学检测方法相比较,本方法更为快速,特异性更高。
  PCR检测试剂盒的使用技巧:
  一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
  1、注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA段作为阳性对照。
  2、标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
  3、用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
  4、在7号管中加入5μL1×10E8拷贝/μL的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
  5、换枪头,在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
  6、换枪头,在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
  7、重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

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