仓鼠DNA甲基转移酶3AELISA检测试剂盒​操作步骤

仓鼠DNA甲基转移酶3AELISA检测试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

NRK-52E，大鼠肾细胞

H9c2大鼠心肌细胞（ATCC来源）

C2C12, 小鼠肌原细胞

NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系

大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）

HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系

CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系

COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞

SF9, 昆虫卵巢细胞

BRL 3A, 大鼠肝正常细胞

HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞

HET-1A, 人食管上皮细胞

RGC-5, 小鼠视网膜神经节细胞

GC-1, 鼠精原细胞

293A，人胚肾上皮细胞系（腺病毒包装级别）

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞

293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系

EPC, 大鼠血管内皮祖细胞

HBE, 正常人支气管上皮细胞系

HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮细胞

HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系

HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞

HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞

LX-2, 人肝星形细胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞