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仓鼠DNA甲基转移酶3AELISA检测试剂盒​操作步骤

日期:2021-09-30浏览:116次

仓鼠DNA甲基转移酶3AELISA检测试剂盒操作步骤:


1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。

NRK-52E,大鼠肾细胞

H9c2大鼠心肌细胞(ATCC来源)

C2C12, 小鼠肌原细胞

NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系

大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)

HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系

CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系

COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞

SF9, 昆虫卵巢细胞

BRL 3A, 大鼠肝正常细胞

HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞

HET-1A, 人食管上皮细胞

RGC-5, 小鼠视网膜神经节细胞

GC-1, 鼠精原细胞

293A,人胚肾上皮细胞系(腺病毒包装级别)

hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞

293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系

EPC, 大鼠血管内皮祖细胞

HBE, 正常人支气管上皮细胞系

HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮细胞

HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系

HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞

HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞

LX-2, 人肝星形细胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞


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