欢迎访问上海研生实业有限公司网站

返回首页|联系我们

全国统一服务热线:

15201736385
技术文章您当前的位置:首页 > 技术文章 > ATP酶钙离子转运蛋白PMCA3抗体的生物素化标记实验要点

ATP酶钙离子转运蛋白PMCA3抗体的生物素化标记实验要点

日期:2021-06-22浏览:61次

ATP酶钙离子转运蛋白PMCA3抗体的生物素化标记实验要点:
1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件;
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

上一篇:胎盘碱性磷酸酶免疫组化试剂盒样本处理及要求

下一篇:肺炎支原体核酸检测试剂盒实验步骤

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

021-59989018

扫一扫,关注我们