欢迎访问上海研生实业有限公司网站

返回首页|联系我们

全国统一服务热线:

15201736385
技术文章您当前的位置:首页 > 技术文章 > 瘰疬分枝杆菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素

瘰疬分枝杆菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素

日期:2021-05-25浏览:70次

瘰疬分枝杆菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

人血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA试剂盒 Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit
人血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)ELISA试剂盒 Human Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit
人血管紧张肽酶A(ATA)ELISA试剂盒 Human Angiotensinase A,ATA ELISA Kit
人血管紧张肽酶A(ATA)ELISA试剂盒 Human Angiotensinase A,ATA ELISA Kit
人血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA试剂盒 Human Angiotensin converting enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
人血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA试剂盒 Human Angiotensin converting enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
人血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒 Human Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit
人血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒 Human Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit
人血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒 Human angiotensinogen,aGT ELISA Kit
人血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒 Human angiotensinogen,aGT ELISA Kit
人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA试剂盒 human angiotensin Ⅱ receptor type Ⅰa,AgtrⅠa ELISA Kit
人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA试剂盒 human angiotensin Ⅱ receptor type Ⅰa,AgtrⅠa ELISA Kit

上一篇:倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR检测试剂盒应用案例

下一篇:博尔纳病病毒RT-LAMP试剂盒特点优势

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

021-59989018

扫一扫,关注我们