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ELISA试剂盒拥有两大洗涤方法你可记清楚了

日期:2021-01-27浏览:81次

   ELISA试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中AIF水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入AIF抗原、生物素化的抗小鼠AIF抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的AIF呈正相关。
  洗涤虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELISA靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。
  ELISA试剂盒洗涤的两大方法:
  一、浸泡式
  1.吸干或甩干孔内反应液;
  2.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去);
  3.浸泡,即将洗涤液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;
  4.吸干孔内液体。吸干应彻底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;
  5.重复操作c和d,洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高,可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
  二、流水冲洗式
  初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗 2分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡2分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。

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