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更新时间:2024-10-30
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产品名称:人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)
组织来源:外周血
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
培养基:含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:半贴壁半悬浮
细胞形态:圆形,树突状
传代特性:属于高度分化细胞;属于不增殖细胞群
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介:
人外周血DC分离自外周血,由外周血单核细胞诱导而成的;外周血是除骨髓之外的血液,临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中,再在从血液中提取分离得到造血干细胞,我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞,在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞,典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串样集落,细胞大而形态不规则,表面皱褶多,亦可见少量短刺状突,胞内细胞器丰富并可见吞噬泡,具有较强的迁移能力,伴随有部分未诱导成的单核细胞,贴壁形态多样。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成,多数呈悬浮生长, 细胞呈圆形,细胞体积进一步增大,表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 ),伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志,主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,进而激活T淋巴细胞,诱导免疫应答,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节;未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力,但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答,不能激活T细胞的信号,可导致T细胞无能,从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低,一般在30%以下。
方法简介:
实验室分离的人外周血成熟DC采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定、细 胞 形态等综合鉴定,纯度可达80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
公司正在出售的产品:
细胞松弛素B `1mg
CytochalasinB,Helmihosporiumdematioideum
50mg
CytochromeC,frombovinehea
小鼠多巴胺(DA)ELISA 试剂盒
Rat visfatin / visfatin (visfatin) ELISA Kit 大鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)试剂盒
HumahromboxaneA2,TX-A2ELISAKit 人血栓素A2(TX-A2)试剂盒 进口分装
HumanAquaporin3,AQP-3试剂盒人水通道蛋白3(AQP-3)试剂盒
植物乙酰羧化酶(ACETYL-COACARBOXYLASE)活性比色法定量试剂盒20次
Humahyroxine-BindingGlobulinAssay,TBGELISAKit人甲状腺结合球蛋白(TBG)试剂盒
棕榈酰转移酶GODZ抗体
博莱水解酶抗体
KIRREL3重组小鼠 KIRREL3 / NEPH2 蛋白 (His 标签) Protein
ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.1mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(1-39) 促肾上腺皮质激素(1-39)(抗原)
APOL1重组人 APOL1 / apolipoprotein L1 蛋白 (His 标签) Protein
FCGR3B Protein Human 重组人 CD16b / FCGR3B 蛋白
IL2RG Protein Rat 重组大鼠 IL2RG / CD132 蛋白
催乳素诱导蛋白(PIP)重组蛋白 Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)
FCGR3B Protein Human 重组人 CD16b / FCGR3B 蛋白
PTN重组小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein
KLRK1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 NKG2D / KLRK1 蛋白 (aa 78-216, His 标签)
CD22重组人 Siglec-2 / CD22 蛋白 (aa 176-687, His 标签) Protein
人外周血树突状细胞(成熟DC细胞)大鼠神经介素S(NMS)试剂盒 ,英文名: NMS ELISA Kit
Mouse fibronectin (FN) ELISA Kit 小鼠纤连蛋白(FN)试剂盒
RatneuropeptideY,NP-YELISAKit 大鼠神经肽Y(NP-Y)试剂盒 进口分装
CLIAKitforHBcAb(IgM)乙型肝核心抗体IgM
细胞半胱蛋白酶-2(CASPASE-2)活性比色法定量试剂盒20次
RatVitaminK1,VK1ELISAKit大鼠K1(VK1)试剂盒
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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