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更新时间:2024-11-07
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产品名称:小鼠小气道平滑肌细胞
组织来源:小气道
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
培养基:基础培养基,含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传2-3代左右
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
小鼠小气道平滑肌体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞简介:
小鼠小气道平滑肌分离自小气道组织;临床上通常将内径小于2mm的小细支气管称为小气道。小气道具有气流阻力小,但易阻塞的特点。在平静吸气时,空气进入狭窄的鼻咽部,产生涡流。由于小气道已无软骨支持,在脱离纤维鞘嵌入肺组织后,管腔通畅性不象软骨性气道,易于受胸腔的压力变化的影响。小气道上皮细胞形成连续呼吸道内层,作为隔绝外界有害物质的物理和功能屏障发挥着的作用。小气道位于肺泡和气管的交界处,这些细胞在功能上能够调节免疫反应、产生化学因子进行宿主防御、表达粘附分子,并可能通过HLA-DR表达呈递抗原;它们还能产生液体有助于肺液的平衡。许多呼吸道疾病,如哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纤维化,都涉及呼吸道表面上皮细胞的破坏;小气道上皮细胞的培养可为防止呼吸道扩增疾病和重塑提供新的治疗选择。小气道平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。小气道的生理功能特点:①小气道阻力小;②气流速度慢;③可调节控制通气与血流比例。小气管平滑肌细胞主要功能:①保持气道张力维持小气道形态;②肺小气道进行气体交换,病变可引起换气功能障碍;③炎症、痰液阻塞或当气道外压大于气道内压时容易造成小气道闭合、萎陷。小气管平滑肌细胞与主要病生理变化:①支气管炎;②肺气肿;③慢性阻塞性肺疾病。
方法简介:
实验室分离的小鼠小气道平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的小鼠小气道平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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