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更新时间:2024-11-04
小鼠胚胎成纤维细胞
商品属性:
组织来源 | 产品规格 | 细胞形态 | 货号 |
胚胎组织 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 成纤维细胞样 | YS-01X7424 |
细胞简介:
小鼠胚胎成纤维分离自胚胎;成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞,能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子,故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性,且分泌效果优于外源添加的一些因子,而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境,故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。
原代细胞的培养条件:
一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养
1、细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性;
2、细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L;
3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养;
4、 胎牛血清浓度为10%-80%
5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养;
6、在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮;
7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状,应将原代细胞换液;
8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时,应将细胞悬液经低速离心后换液。
二、悬浮细胞培养
1、原代培养时要尽量去除红细胞;
2、短期培养,可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行;
3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内,进行分瓶试验;
4、长期培养时,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长;
5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次;
6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。
方法简介:
公司实验室分离的小鼠胚胎成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的小鼠胚胎成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传3-5代
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞传代及冻存:
细胞传代步骤 | 细胞冻存步骤 |
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,细胞变圆脱落后,加入2ml培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
原代细胞的培养方法一般有以下4种:
① 组织块培养法
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
② 消化培养法
③ 悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
④器官培养
器官培养是指从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养,器官培养可保持器官组织的相对完整性,可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。
公司正在出售的产品:
含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
脱氢酶测试盒 紫外分光光度法 50管/48样
还原糖含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样
纤维素酶(CL)测试盒 可见分光光度法 50管/24样
豚鼠免疫球蛋白G2(IgG2)试剂盒 ,英文名: IgG2 ELISA Kit
Human granulysin (histatin 5) ELISA Kit 人富组蛋白(histatin 5)试剂盒
rabbitImmunoglobulinG,IgGELISAKit 兔子免疫球蛋白G(IgG)试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforBAFF-R(HumanBcellactivationfactorrfromthetumornecrosisfactorfamilyreceptor)ELISAKit人B细胞活化因子受体
线虫补骨脂素(4-imethylpsoralen)诱导突变试剂盒10次
Rabbitcatecholamine,CAELISAKit兔儿茶酚胺(CA)试剂盒规格:96T/48T
HERC3 E3泛素蛋白连接酶抗体
DNA聚合酶μ/DNA pol μ抗体
IGFBP3重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein
结合蛋白4(RBP4)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)
CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein
IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白
HA Protein H12N5 重组甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
结合蛋白4(RBP4)重组蛋白 Recombinant Retinol Binding Protein 4, Plasma (RBP4)
IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白
IGFBP3重组人 IGFBP3 / IBP3 蛋白 Protein
HA Protein H12N5 重组甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签) Protein
小鼠胚胎成纤维细胞大鼠钙调素(CAM)试剂盒 ,英文名: CAM ELISA Kit
Lester pig mononucleosis septozotocin (listeriolysin) ELISA Kit 猪单核细胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)试剂盒
转基因植物NPTⅡ基因核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
CLIAKitforMCP-2/CCL8(Humanmonocytechemotacticprotein2)ELISAkit人单核细胞趋化蛋白2
体液腺苷酸环化酶(AdenylateCyclase)活性荧光定量试剂盒20次
ELISAKitIFN-α猫α干扰素