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更新时间:2024-10-30
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产品名称:人输尿管平滑肌细胞
组织来源:尿道
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
培养基:基础培养基,含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:长梭形
传代特性:可传3-5代左右,3代以内状态最佳
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
人输尿管平滑肌细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介:
人输尿管平滑肌分离自输尿管组织;输尿管上接肾盂,下连膀胱,是一对细长的管道,呈扁圆柱状,位于腹膜后,为一肌肉粘膜所组成管状结构,沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆。输尿管有三个狭窄部:一个在肾盂与输尿管移行处(输尿管起始处);一个在越过小骨盆入口处;最后一个在进入膀胱壁的内部。这些狭窄是结石、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构,即瓦耳代尔鞘,它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管。临床上将输尿管分为上、中、下三段,也可称为腹段、盆段、膀胱段。其中,腹段自肾盂输尿管交界处,到跨越髂动脉处;盆段,自髂动脉到膀胱壁;膀胱段,自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜、输尿管开口。输尿管管壁分为4层,黏膜层、固有层、肌层、外膜。黏膜层表面为移行上皮,约有4-5层细胞;固有层由细密的结缔组织构成,内含胶原纤维和少量弹性纤维;输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成;外膜为疏松结缔组织,营养血管由外膜进入输尿管。输尿管有较厚的平滑肌层,可作节律性的蠕动,使尿液不断的流入膀胱。因此对输尿管平滑肌运动的研究,是尿动力学的重要研究方向。
方法简介:
实验室分离的人输尿管平滑肌采用胶原酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的人输尿管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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