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更新时间:2024-10-29
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产品名称:大鼠肾上腺皮质细胞
组织来源:肾上腺组织
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
包被条件 鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传1-3代左右;2代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
细胞简介:
大鼠肾上腺皮质分离自肾上腺组织;肾上腺是人体相当重要的内分泌器官,由于位于两侧肾脏的上方,故名肾上腺。肾上腺左右各一,位于肾的上方,共同为肾筋膜和脂肪组织所包裹。左肾上腺呈半月形,右肾上腺为三角形。从侧面观察,腺体分肾上腺皮质和肾上腺髓质两部分,周围部分是皮质,内部是髓质。肾上腺内部是髓质部分,分泌肾上腺素和。这些激素在应激状态释放增多,能够帮助升高血压,加快心率,升高血糖,动员全身的储备物质,为机体与外界环境的抗争作好充分准备。肾上腺外部是皮质部分,分泌醛固酮、和少量的雌雄激素。醛固酮能够促进小便中尿钾的排出和尿钠的重吸收,正常数量的醛固酮,对维持人体正常血压有重要作用。但是如果过多分泌,会导致高血压和低血钾。是人体必需的激素之一。当人体处于应激状态时,比如感冒,发烧,遇到突发事件的时候,肾上腺皮质分泌大量的,这些能够动员机体的存储能源,为应对内部或者外部重要事件提供充分的物质准备。当缺乏时,机体在遇到重大事件的时候,往往缺乏足够应对能力,容易被病毒或外界压力所击倒。肾上腺产生的雄激素,对男性来讲,并非,但是对女性而言,是雄激素的一个重要来源。
方法简介:
公司实验室分离的大鼠肾上腺皮质采用胶原酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的大鼠肾上腺皮质经3β-HSD免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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