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更新时间:2024-11-04
相对定量分析方法 :
2-ΔΔCt
染料法荧光定量PCR试剂盒前提:目标序列和内参序列的扩增效率接近100%且偏差在5%以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、计算表达水平比率:
2 –ΔΔCT=表达量的比值
使用方法:
一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DNA 段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
具有下列特点:
1.根据 指标的保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级,可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
4.一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5.本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6.本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
需要自备的器材:
1.仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:荧光 PCR 反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯(DEPC)水
处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
Inhibin alpha antibody [EPY2782]原装、分装型肝炎核心抗原(HBV)(18-27)
Inhibin alpha antibody [EPY2782]原装、分装型肝炎病毒核心(107-115)
SRPRB antibody原装、分装型肝炎病毒核心,(型肝炎抗原31)
TMEM35 antibody原装、分装型肝炎病毒核心蛋白(128-140)
PIEZO2 antibody原装、分装型肝炎病毒膜蛋白(183-191)
tenomodulin antibody原装、分装型肝炎病毒膜蛋白(335-343)
JAM-C antibody原装、分装型肝炎病毒聚合酶(455-463)
Human SLC5A4 peptide原装、分装型肝炎病毒聚合酶(502-510)
IRHOM1 antibody原装、分装型肝炎病毒聚合酶(655-663)TIMP1 antibody [EP1549RY]原装、分装胃泌素释放肽,人
AKT1 (phospho S473) antibody [EP2109Y]原装、分装胃泌素释放肽,猪
AKT1 (phospho S473) antibody [EP2109Y]原装、分装胃泌素释放肽-Lys(生物素),人
AKT1 (phospho S473) antibody [EP2109Y]原装、分装胃泌素释放肽(1-6),人
Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y1253) antibody [EP1502Y]原装、分装胃泌素四肽
Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y1253) antibody [EP1502Y]原装、分装胃饥饿素,人
Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y1253) antibody [EP1502Y]原装、分装胃饥饿素,大鼠
MMP26 antibody [EP1283Y]原装、分装生长激素释放子,小鼠
MMP26 antibody [EP1283Y]原装、分装生长激素释放子,绵羊
染料法荧光定量PCR试剂盒基质金属蛋白酶9/明胶酶B检测试盒20mg
基质金属蛋白酶抑制子2检测试盒20mg
基质金属蛋白酶抑制子3检测试盒20mg
基质金属蛋白酶抑制子4检测试盒20mg
基质金属蛋白酶组织抑制子1检测试盒5mg
基质裂解蛋白/基质溶素检测试盒50mg
基质细胞衍生子1a检测试盒20mg
基质细胞衍生子1β检测试盒100mg
激动异构酶/细胞分裂素MB检测试盒0.2ml
注意事项:
1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。
3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。
?5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。