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基础信息Product information
产品名称:

PCR测定试剂盒

产品简介:

PCR测定试剂盒引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。$nNA在体外大量扩增。

产品型号:50T

厂商性质:经销商

访问量:42

更新时间:2020-08-19

产品特性Product characteristics

实验过程:
一、PCR测定试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。

特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
适用范围【参考值】
1.试剂盒有效性判定:
(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。

PCR实验步骤:
典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
下列是公司正在热销的产品:

Lactate Dehydrogenase isozyme H4 antibody原装、分装组蛋白H3(116-136),N15-39

LOXL1 antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒1型及2型蛋白酶底物

LGALS3BP antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1膜蛋白gp41(1-23)酰胺(隔离种群BRU/JRCSF)

HADH antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1膜蛋白gp120(278-292)(BH10, BH8,HXB2, HXB3, PV22菌株)

Histone H1t antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1(137-154)

ICA69 antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1张口器蛋白p24(194-210)

TMEM184A antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1张口器蛋白p24(65-73)(种群MAL/U455)

Arg2 antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1反转蛋白(34-50)

FAAH2 antibody原装、分装人体免疫缺陷病毒-1 tat蛋白(1-9)PDGFR beta (phospho Y740) antibody [EP2135Y]原装、分装gp100 (177-186)

PDGFR beta (phospho Y740) antibody [EP2135Y]原装、分装gp100 (178 - 187)

PDGFR beta (phospho Y740) antibody [EP2135Y]原装、分装gp100 (457 - 466)

PKR (phospho T451) antibody [EPR2152Y]原装、分装gp100 (476 - 485)

PKR (phospho T451) antibody [EPR2152Y]原装、分装gp100 (570-579)

PKR (phospho T451) antibody [EPR2152Y]原装、分装gp100 (614-622)

beta Catenin (phospho T41 + S45) antibody [EP1905Y]原装、分装gp100 (619-627)

beta Catenin (phospho T41 + S45) antibody [EP1905Y]原装、分装gp100 (639-647)

beta Catenin (phospho T41 + S45) antibody [EP1905Y]原装、分装gp120,人体免疫缺陷病毒
PCR测定试剂盒环加酶2检测试盒20mg

环鸟苷检测试盒20mg

环腺苷检测试盒20mg

黄嘌呤化酶检测试盒20mg

黄体生成素检测试盒20mg

蛔虫抗体检测试盒20mg

混合淋巴细胞反应封闭子检测试盒20mg

混合系列蛋白激酶样结构域检测试盒20mg

活化蛋白C检测试盒20mg

 

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