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更新时间:2024-11-05
本网站销售的化学产品仅供科学研究或工业应用,不直接用于食品、药品、临床或动物的诊断或治疗!
产品名称:大鼠眼动脉平滑肌细胞
组织来源:眼动脉
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
包被条件:
培养基:基础培养基,含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传3代左右
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
大鼠眼动脉平滑肌体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的优良培养状态。
细胞简介:
眼动脉是眼眶及内容物最主要的血液供应,是颈内动脉主要分枝,也是交通颅内外血管的重要通道。有研究结果认为,绝大多数眼动脉起源于ICA刚出海绵窦处,且多数起源于ICA床突上段内上壁,少数起源于上壁,少数眼动脉可起源于ICA海绵窦段及脑膜中动脉。眼动脉的走行分为颅内段、管内段及眶内段,眼动脉在管内段一般行走于视神经上方,颅内段和眶内段再分为五段:1、短臂;2、A角;3、长臂;4、B角;5、远侧部。眼动脉进入眶内后沿视神经向下外侧走行,终止于眶孔的上内侧角。眼动脉的分枝一般分为眼组、眶组及眶外组。眼组分为视网膜中央动脉睫前动脉及眼球的脉络丛;眶组分为泪腺动脉和肌动脉;眶外组分为筛后动脉、筛前动脉、眶上动脉、睑内侧动脉、鼻背动脉(终末枝)。眼动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。眼动脉供应整个眼球、眼球附属器及部分附近组织的营养。眼动脉可发生痉挛、血栓、栓塞及出血等,均可严重影响视力。颈内动脉眼动脉瘤简称眼动脉瘤,又称床突旁动脉瘤或颈内动脉腹侧动脉瘤。眼动脉瘤是位于眼动脉和后交通动脉之间的动脉瘤,占全部颅内动脉瘤的0.47%~9.26%,30%~70%患者表现为SAH,1/3有视功能损伤,如视力减退、视野缺损和视神经等。体外培养的眼动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
方法简介:
实验室分离的大鼠眼动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的大鼠眼动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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