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更新时间:2024-11-05
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产品名称:人胰腺癌组织源星状细胞
组织来源:胰腺癌
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
包被条件:
培养基:含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传2-3代
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
人胰腺癌组织源星状体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞简介:
人胰腺癌组织源星状分离自患有胰腺癌病人的胰腺癌组织;胰腺癌是一种恶性程 度很高,诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤,约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1%,是预后差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高,手术死亡率较高,而很低。胰腺癌 的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关;近年来的调查报告发现糖尿病人群中胰腺癌的发 病率明显高于普通人群;也有人注意到慢性胰腺炎病人与胰腺癌的发病存在一定关系,发现慢性胰腺炎病人发生胰腺癌的比例明显增高;另外还有许多因素与此 病的发生有一定关系,如职业、环境、地理等。随着医学技术的进步,大部分癌症的生存率都在提高,例如乳腺癌,结直肠癌等肿瘤,近几十年来,生存率得到 了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滞不前,缺乏有效的治疗方法,的死亡率使其成为“癌中",近年来胰腺癌微环境的研究引起了诸多学者的重视。胰腺癌微环境构成复杂,其中,胰腺星状细胞是胰腺癌微环境中重要的间质细胞之一,在胰腺癌细胞生长、迁移、侵袭、血管生成、免疫逃逸、转移及耐药中发挥重要的作用。因此针对胰腺星状细胞和胰腺癌细胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的预后。胰腺星状细胞(pancreaticstellate cells , PSC)是一种胰腺特异性间质细胞,多在胰腺组织内血管和导管周围聚集,环绕在腺泡的基底部位,正常静比状态下只占胰腺细胞的4%左右,细胞质中含有丰富的维生素A脂滴,以表达胶质纤丝酸性蛋白质(glial filament acidic protein , GFAP )、结合蛋白(Desmin)为特征。在胰腺组织损伤、应激等条件下PSC被激活,成为一种肌成纤维细胞,胞质中富含维生素A的脂滴消失,以表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin , α-SMA)为标志,能大量合成细胞外基质(extracellular matrix , ECM)和分泌多种细胞因子。胰腺癌微环境中存在大量激活的PSC,在胰腺癌的发生发展中起着重要作用。PSC通过诱导胰腺癌细胞(pancreatic cancercells , PCC)上皮一间质转变(epithelial-mesenchymaltransition , EMT)促进胰腺癌侵袭和转移侵袭和转移是肿瘤细胞脱离原发肿瘤灶到达靶器官的一个多步骤过程,众多研究表明EMT与胰腺癌的侵袭转移密切相关。EMT主要的特征是上皮细胞特征丢失同时伴间质细胞特征获得,如E一钙茹蛋白(E-cadherin)表达下降,波形蛋白(Vimentin)表达上调。karnevi等研究发现,PSC与PCC共培养后能够诱导PCC上皮性细胞标志(E-cadherin , β-catenin)丢失,促进间质性细胞标志(Vimentin,Snai-1)获得,表明PSC在PCC的EMT形成过程中发挥了重要的作用。PSC参与胰腺癌进展的各个环节,而PSC活化是PSC发挥功能的重要部分。因此,如能抑制PSC活化或控制PSC细胞功能将为胰腺癌提供潜在的治疗策略。因此,随着针对抑制PSC活化或其功能的研究的深入,有望从胰腺癌微环境角度切实提高胰腺癌的效果。
方法简介:
实验室分离的人胰腺癌组织源星状采用胶原酶消化法结合密度梯度离心法制备而来制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的人胰腺癌组织源星状经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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