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更新时间:2024-11-05
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产品名称:小鼠脊髓微血管内皮细胞
组织来源:脊髓
产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶
培养信息:
包被条件:PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%)
培养基:含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:内皮细胞样
传代特性:可传2-3代
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
小鼠脊髓微血管内皮体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞简介:
小鼠脊髓微血管内皮分离自脊髓组织;脊髓是细细的管束状的神经结构,位于脊柱的椎管内且被脊椎保护;是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分,在椎管里面,上端连接延髓,两旁发出成对的神经,分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区,主要由神经细胞构成;在灰质区周围为白质区,主要由有髓神经纤维组成;脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。微血管又称毛细血管。分布于各种组织和细胞间的微细的血管。介于微动脉和微静脉之间。平均直径7~9微米,数量极多,成网状分布。管壁由一层内皮细胞及一薄层基膜组成,厚约0.5微米。基膜外面有薄层结缔组织,其中有纤维细胞、巨噬细胞和周细胞等。细的毛细血管由一个内皮细胞围成管腔,较粗的毛细血管由2~3个内皮细胞围成。分布于肌肉组织、神经组织和结缔组织中的毛细血管,内皮细胞间为缝隙连接(缝隙宽150埃),称连续毛细血管;分布于内分泌腺、肾脏等处的毛细血管,除有缝隙连接外,细胞本身有许多小孔,(孔径800~1000埃),称有孔毛细血管;分布于肝、脾、骨髓及某些内分泌腺的毛细血管,管腔扩大,称血窦。毛细血管的管壁薄、通透性大、管径细(8~10微米)、数量多、血流速度慢,这些特点使其成为血液与组织液进行物质交换的场所,又称交换血管。血窦(sinusoid)由毛细血管管腔扩大而成,窦壁的一般结构与毛细血管壁相同,由单层内皮细胞构成,内皮细胞膜上有窗孔。不同器官的窦壁结构各有差别。脾血窦的内皮细胞间有较宽裂隙;肝血窦内皮细胞是不连续的,有较宽的细胞隙(0.1~0.5微米);肝、脾血窦的基膜不完整或无基膜,通透性比毛细血管大,较大的蛋白质和血细胞可以通过。肝血窦壁内有枯否细胞,脾血窦内外有巨噬细胞,这两种细胞都有吞噬能力,可吞噬清除血液中的异物、细菌等有害物质,是机体单核巨噬细胞系统的重要组成分。某些内分泌腺的血窦有连续的基膜。
方法简介:
实验室分离的小鼠脊髓微血管内皮采用 - 胶原酶联合消化法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的小鼠脊髓微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养步骤:
一、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
二、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a)、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
b)、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。
收到细胞如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作
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