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基础信息Product information
产品名称:

DH10B 感受态细胞

产品简介:

公司供应的DH10B 感受态细胞提供售前售后服务,感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。

产品型号:

厂商性质:经销商

访问量:21

更新时间:2020-09-08

产品特性Product characteristics

技术传授:
冻存培养基
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.产品仅用于科研使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低  1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

 产品名称

 规格

 货号

 DH10B 感受态细胞

 100ul*10/100ul*50

 YSRIBIO9657


注意事项:
1. 感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 产品仅用于科研为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
●  一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100 μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30 分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 分钟,该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时(160-220 转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5 将离心管内容物混匀,吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16 小时。
●  涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA 总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
luteotropic hormone, LH Elisa Kit延胡索甲素(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Anti-myocardial antibody, AMA Elisa Kit脱氢紫堇碱;去氢紫堇碱(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Anti-myocardial antibody, AMA Elisa Kit小檗红碱(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

anti-centrol and centrosome antibody, ACA Elisa Kit欧夹竹桃苷(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

anti-centrol and centrosome antibody, ACA Elisa Kit去亚甲基小檗碱(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

phosphatidylinositol antibody IgG/IgM, PI Ab-IgG/IgM Elisa Kit喹乙醇;喹酰胺醇(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

phosphatidylinositol antibody IgG/IgM, PI Ab-IgG/IgM Elisa Kit喹乙醇;喹酰胺醇Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

complex edprostate specific antigen, cPSA Elisa Kit路路通酸(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

complex edprostate specific antigen, cPSA Elisa Kit安乃近(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

trypsin Elisa Kit艾格列净;依帕列净;恩格列嗪Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

trypsin Elisa KitBQ123Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Interferon β, IFN-β/IFNB Elisa Kit泛影酸(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Interferon β, IFN-β/IFNB Elisa Kit甘罗溴铵(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

platelet factor 3,  PF3 Elisa Kit磺胺(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

platelet factor 3,  PF3 Elisa Kit磺胺嘧啶(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Leptin Soluble Receptor, sLR Elisa Kit磺胺嘧啶Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T
DH10B 感受态细胞LRRC62  富含亮氨重复蛋白62一抗    特价促销 0.2ml Cellulase

MFAP1  微原纤维胶原相关蛋白1一抗    特价促销 0.2ml Chondroitin sulfate

MNS1  减数分裂特异核结构蛋白1一抗    特价促销 0.2ml Isonicotinic acid

MPP9/MPHOSPH9  有丝分裂细胞周期蛋白MPP9一抗    特价促销 0.2ml LMalic acid

NEDD1  神经前体细胞表达蛋白1一抗    特价促销 0.2ml Proteinase K Solution, 20 mg/ml

NEK1  丝氨/苏氨蛋白激酶NEK1一抗    特价促销 0.2ml PolyLlysine solution ( 0.1%)

NEK8  丝氨/苏氨蛋白激酶NEK8一抗    特价促销 0.2ml Tetracycline hydrochloride solution, 50 mg/ml, sterile

NSP5  核结构蛋白5一抗    特价促销 0.2ml DGlucose6phosphate, disodium, dihydrate

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