欢迎访问上海研生实业有限公司网站

返回首页|联系我们

全国统一服务热线:

15201736385
产品中心您当前的位置:首页 > 产品中心 > 感受态细胞 > 克隆感受态细胞 > Stbl3 电击感受态细胞
基础信息Product information
产品名称:

Stbl3 电击感受态细胞

产品简介:

公司供应的Stbl3 电击感受态细胞提供售前售后服务,感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。

产品型号:

厂商性质:经销商

访问量:23

更新时间:2020-09-08

产品特性Product characteristics

注意事项:
1. 感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 产品仅用于科研为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。

 产品名称

 规格

 货号

 Stbl3 电击感受态细胞

 50ul*5/50ul*20

 YSRIBIO9651


实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
●  一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
2 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(100 μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30 分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3 分钟,该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基(不含抗生素), 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时(160-220 转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5 将离心管内容物混匀,吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16 小时。
●  涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA 总量较少,可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)
cyclic adenosine monophosphate, cAMP Elisa Kit原苏木素B/原巴西苏木素(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule, ALCAM Elisa Kit远志酸(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule, ALCAM Elisa Kit远志皂苷元(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Interleukin 9, IL-9 Elisa Kit月桂烯(香叶烯)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Interleukin 9, IL-9 Elisa Kit芸香柚皮苷(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Macrophage Migration Inhibitory Factor, MIF Elisa Kit泽泻醇B醋酸酯(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Macrophage Migration Inhibitory Factor, MIF Elisa Kit獐牙菜苷(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

transforming growth factor α, TGF-α Elisa Kit獐牙菜苦苷(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

transforming growth factor α, TGF-α Elisa Kit樟脑(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Progesterone, PROG Elisa Kit芝麻林素(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Progesterone, PROG Elisa Kit芝麻素Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

estrogen, E Elisa Kit芝麻素(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

estrogen, E Elisa Kit槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Vascuolar cell adhesion molecule 1, VCAM-1 Elisa Kit知母皂苷A3(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T

Vascuolar cell adhesion molecule 1, VCAM-1 Elisa Kit知母皂苷BII(标准品)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:96T

Interleukin 8, IL-8 Elisa Kit2',3'-二脱氧鸟苷(ddG)Rat/大鼠Elisa试剂盒规格:48T
Stbl3 电击感受态细胞RCC2  染色体浓缩调节蛋白2一抗    特价促销 0.2ml Oxaloacetic acid

SEPT1  细胞分化蛋白SEP1一抗    特价促销 0.2ml Zinc sulfate, heptahydrate

SEPT10  细胞分化蛋白SEPT10一抗    特价促销 0.2ml Potassium sodium tatrate, tetrahydrate

SEPT12  细胞分化蛋白SEPT12一抗    特价促销 0.2ml Biuret

SEPT14  细胞分化蛋白SEPT14一抗    特价促销 0.2ml Magnesium sulfate anhydrous

SPECC1L  细胞质和纺锤体机化蛋白A一抗    特价促销 0.2ml Quartz sand

Septin 3  神经元特异性蛋白3一抗    特价促销 0.2ml 3AT

UCHL5IP  泛素羧基末端水解酶5互相作用蛋白1一抗    特价促销 0.2ml Sodium phosphate, tribasic, dodecahydrate
技术传授:
冻存培养基
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.产品仅用于科研使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低  1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

留言框

  • 产品:

  • 留言内容:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 详细地址:

  • 省份:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

上一篇:Stbl3 感受态细胞

下一篇:TG1 电击感受态细胞

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

021-59989018

扫一扫,关注我们