产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）核酸检测试剂盒

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厂商性质：经销商

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更新时间：2021-06-17

使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

8.公司产品仅用于科研。

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

O-(2,3,4,5,6-五氟苄基)羟胺盐酸盐(>98.0%(HPLC)(N)) O-(2,3,4,5,6-Pentafluorobenzyl)hydroxylamine Hydrochloride 57981-02-9 质量规格：>98.0%(HPLC)(N)  组织钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

壬烷(>99.5%(GC),标准物) Nonane 111-84-2 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  血液钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

二十烷(>99.5%(GC),标准物) Eicosane 112-95-8 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  体液钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

二十一烷(>99.0%(GC)，标准物质) Heneicosane 629-94-7 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质  环境钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

二十二烷(>99.0%(GC)，标准物质) Docosane  629-97-0 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质  食物钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

二十三烷(>99.0%(GC)，标准物质) Tricosane 638-67-5 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质  饮料钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

二十四烷(>99.0%(GC)，标准物质) Tetracosane 646-31-1 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质  细菌钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

二十五烷(>99.0%(GC)，标准物质) Pentacosane 629-99-2 质量规格：>99.0%(GC)，标准物质  酵母钠离子（Na）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

正辛酸酯(>99.5%(GC),标准物质) Methyl n-Octanoate 111-11-5 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  细胞钠离子（Na）浓度荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

壬酸酯(>99.5%(GC),标准物质) Methyl Nonanoate  1731-84-6 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  组织钠离子（Na）浓度荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次

月桂酸酯(>99.5%(GC),标准物质) Methyl Laurate  111-82-0 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  锌（Zn）定量检测试剂盒 进口/国产 规格：50次

肉豆蔻酸酯(>99.5%(GC),标准物质) Methyl Myristate 124-10-7 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  氯（Cl）定量检测试剂盒 进口/国产 规格：50次

硬脂酸酯(>99.5%(GC),标准物质) Methyl Stearate 112-61-8 质量规格：>99.5%(GC),标准物质  血液钙（Ca）定量检测试剂盒 进口/国产 规格：50次

亚麻酸酯(>98.0%(GC),标准物质) Methyl Linolenate 301-00-8 质量规格：>98.0%(GC),标准物质  血液镁离子（Mg）浓度化学比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：50次

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)核酸检测试剂盒Oxytetracycline 土霉素 79-57-2  100mg

Deoxyshikonin 去氧紫草素 43043-74-9  20mg

透析袋 扁宽32 截留分子量15000 0.5m/即用型  管

Baicalin 黄芩苷 21967-41-9  10mg

植物基因组DNA提取试剂盒 100T  盒

Propyl gallate 没食子酸丙酯 500g  瓶

D-β-Tocotrienol D-β-生育三烯酚 490-23-3  30mg

Collgen TypeⅠ 胶原蛋白Ⅰ型(可溶) 1g  瓶

无粉胶手套 小号  盒

L-Cystine L-胱氨酸 56-89-3  200mg

Ajugol 益母草苷 52949-83-4  20mg

Vanillin 香草醛 25g  瓶

 GNAT1 基因全长ORF克隆

重组甲型流感 H3N2 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (N294S mutation) (高活性)

 P4HB / DSI 基因全长ORF克隆

食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 CPE 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 CDH16 基因全长ORF克隆

 NAE1 基因全长ORF克隆

 DBH 基因全长ORF克隆

 EFNA1 / Ephrin-A1 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 USP8 基因全长ORF克隆

 Carbonic Anhydrase IV / CA4 CHO细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 TH / Tyrosine Hydroxylase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)