犬源性成分（Canine）核酸检测试剂盒

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更新时间：2021-06-17

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

人核糖核酸酶H(RNASEH)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RNASEH (Ribonuclease H )ELISA Kit

人核糖核酸酶T2(RNASET2)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RNASET2 (Ribonuclease T2) ELISA Kit

人核糖核酸酶抑制因子(RI)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RI (Ribonuclease Inhibitor) ELISA Kit  

人核糖核酸酶(RNASE)酶联免疫吸附测定试剂盒  Human RNASE (Ribonuclease) ELISA Kit

人核糖体蛋白L10(RPL10)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RPL10 (Ribosomal Protein L10) ELISA Kit

人核糖体蛋白L26(RPL26)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RPL26 (Ribosomal Protein L26) ELISA Kit

人核因子κB (NFκB)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human NFκB (Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit

人核因子κB受体激活因子配基(RANκL)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RANκL (Receptor Activator of  Nuclear Factor Kappa B Ligand) ELISA Kit

人核因子κB亚基p65(NF-κB p65)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human NF-κB p65 (Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit

人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MART/Melan-A (Melanoma Marker A) ELISA Kit

人黑色素瘤相关抗原(MAGE)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MAGE (Melanoma-associated Antigen) ELISA Kit

人黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MMSAM (Melanoma Metastasis Surface Adhesion Molecule) ELISA Kit

人β-黑色素细胞刺激素(βMSH)酶联免疫吸附测定试剂盒  Human βMSH (beta-Melanocyte Stimulating Hormone) ELISA Kit

人黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子(MLZE)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human MLZE (Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor) ELISA Kit

人红细胞刺激因子(ESF)酶联免疫吸附测定试剂盒   Human ESF (Erythropoiesis Stimulating Factor) ELISA Kit

人红细胞膜蛋白(EMP)酶联免疫吸附测定试剂盒  Human EMP (Erythrocyte Membrane Protein) ELISA Kit

犬源性成分(Canine)核酸检测试剂盒Schizandrin A 五味子甲素 61281-38-7  20mg

DL-Malic acid DL-苹果酸 25g  瓶

Schiff试剂 100ml  瓶

彩虹245广谱蛋白Marker（11-245KD）50T 250ul  支

RNAsaver(RNA长效保存液) 1.5ml  支

DiO-Ac-LDL DiO标记乙酰化低密度脂蛋白 500ug  瓶

封闭山羊血清正常(原液) 10ml  瓶

0.1% Peptone Water Solution Medium 0.1%蛋白胨水溶液培养基 250g  瓶

Daurisoline 蝙蝠葛苏林碱 70553-76-3  20mg

Levamisole Hydrochloride 盐酸左旋咪唑 16595-80-5  100mg

羊抗纤维蛋白原 1mg  支

L-Arginine HCL L-精氨酸盐酸盐 25g  瓶

食蟹猴 IGFBP5 / IGFBP-5 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 TACC3 基因全长ORF克隆

 SerpinA6 / CBG 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 GPC6 基因全长ORF克隆

 BMF / Bcl2 modifying factor ELISA配对抗体

 KIT 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签

大鼠 TNFRSF13C 基因全长ORF克隆

大鼠 CD79B / B29 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 HSPE1 基因全长ORF克隆

斑马鱼 VEGF165 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 GM-CSF / CSF2 ELISA配对抗体

大鼠 IGF1 基因全长ORF克隆

使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

8.公司产品仅用于科研。