鱼类神经坏死病毒（VNN）核酸检测试剂盒

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更新时间：2021-06-17

PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

8.公司产品仅用于科研。

2,2'-二羟基-4,4'-二氧基二酮(>90.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxy-4,4'-dimethoxybenzophenone 131-54-4 质量规格：>90.0%(GC)  技术平台操作 进口/国产 规格：20样本

4,4'-二羟基二酮(>98.0%(GC)(T)) 4,4'-Dihydroxybenzophenone 611-99-4 质量规格：>98.0%(GC)(T)  多肽合成 进口/国产 规格：1样本

2,2'-二羟基-4-氧基二酮(>98.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxy-4-methoxybenzophenone 131-53-3 质量规格：>98.0%(GC)  DNA合成 进口/国产 规格：1样本

4,4'-二氧基二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Dimethoxybenzophenone 90-96-0 质量规格：>99.0%(GC)  RNA合成 进口/国产 规格：1样本

2,2'-二羟基二酮(>99.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxybenzophenone 835-11-0 质量规格：>99.0%(GC)  化学合成 进口/国产 规格：1样本

4,4'-二氨基二酮(>98.0%(T)) 4,4'-Diaminobenzophenone 611-98-3 质量规格：>98.0%(T)  酸二酯酶系列高通量筛选光谱法检测试剂盒 进口/国产 规格：500次

4,4'-二氯二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Dichlorobenzophenone 90-98-2 质量规格：>99.0%(GC)  细胞色素P450酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格：500次

3,3'-二氨基二酮(>95.0%(GC)(T)) 3,3'-Diaminobenzophenone 611-79-0 质量规格：>95.0%(GC)(T)  单胺氧化酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格：500次

3,3'-二硝基二酮(>99.0%(GC)) 3,3'-Dinitrobenzophenone 21222-05-9 质量规格：>99.0%(GC)  蛋白激酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格：500次

2,4'-二氟二酮(>95.0%(GC)) 2,4'-Difluorobenzophenone 342-25-6 质量规格：>95.0%(GC)  细胞繁殖与毒性高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格：500次

4,4'-二氟二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Difluorobenzophenone 345-92-6 质量规格：>99.0%(GC)  荧光素酶高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格：

1,4-二苄氧基(>98.0%(GC)) 1,4-Dibenzoylbenzene 3016-97-5 质量规格：>98.0%(GC)  颉氨霉素溶液（Valinomycin） 进口/国产 规格：0.1毫摩尔

2,2',4,4'-四羟基二酮(>95.0%(T)) 2,2',4,4'-Tetrahydroxybenzophenone 131-55-5 质量规格：>95.0%(T)  卡那霉素溶液 进口/国产 规格：10毫克/毫升

2,4,4'-三羟基二酮(>98.0%(HPLC)(T)) 2,4,4'-Trihydroxybenzophenone 1470-79-7 质量规格：>98.0%(HPLC)(T)  四环素溶液 进口/国产 规格：10毫克/毫升

鱼类神经坏死病毒（VNN）核酸检测试剂盒Valnemulin Hydrochloride 盐酸沃尼妙林 1g  瓶

Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52 100g  瓶

Isoprenaline Hydrochloride 盐酸异丙素 5g  瓶

L-Threonine L-苏氨酸 25g  瓶

荧光素 1 g  支

BL21(DE3)感受态细胞 10×100ul  袋

11-keto-β-Boswellic acid 11-酮基香酸 17019-92-0  5mg

Coenzyme Q10 辅酶Q10-范醌 1g  瓶

Glycyrrhizic acid 甘草酸 1405-86-3  20mg

Potato Extract Powder 马铃薯浸出粉 250g  瓶

Oil Red O 油红 5g  瓶

RQ1 Rnase-Free Dnase 1000u  支

 Pleiotrophin / PTN 基因全长ORF克隆

 FKBP6 基因全长ORF克隆

大鼠 AQP9 基因全长ORF克隆

 DPPIV 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 RGMA 基因全长ORF克隆

重组大鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (His 标签)

 SHISA4 基因全长ORF克隆

 CATSPER1 基因全长ORF克隆

 BLNK 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

 CFL2 基因全长ORF克隆

小鼠 LGALS3BP 基因全长ORF克隆

小鼠 ZBTB16 基因全长ORF克隆