服务热线
021-59989018
产品简介:
产品型号:
厂商性质:经销商
访问量:246
更新时间:2021-06-17
PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 规格 | 货号 |
鱼类神经坏死病毒(VNN)核酸检测试剂盒 | 50T | HE61501-R |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、样品采集:
1、食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品:用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL,注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管,立即混匀。
3、粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
8.公司产品仅用于科研。
2,2'-二羟基-4,4'-二氧基二酮(>90.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxy-4,4'-dimethoxybenzophenone 131-54-4 质量规格:>90.0%(GC) 技术平台操作 进口/国产 规格:20样本
4,4'-二羟基二酮(>98.0%(GC)(T)) 4,4'-Dihydroxybenzophenone 611-99-4 质量规格:>98.0%(GC)(T) 多肽合成 进口/国产 规格:1样本
2,2'-二羟基-4-氧基二酮(>98.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxy-4-methoxybenzophenone 131-53-3 质量规格:>98.0%(GC) DNA合成 进口/国产 规格:1样本
4,4'-二氧基二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Dimethoxybenzophenone 90-96-0 质量规格:>99.0%(GC) RNA合成 进口/国产 规格:1样本
2,2'-二羟基二酮(>99.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxybenzophenone 835-11-0 质量规格:>99.0%(GC) 化学合成 进口/国产 规格:1样本
4,4'-二氨基二酮(>98.0%(T)) 4,4'-Diaminobenzophenone 611-98-3 质量规格:>98.0%(T) 酸二酯酶系列高通量筛选光谱法检测试剂盒 进口/国产 规格:500次
4,4'-二氯二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Dichlorobenzophenone 90-98-2 质量规格:>99.0%(GC) 细胞色素P450酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格:500次
3,3'-二氨基二酮(>95.0%(GC)(T)) 3,3'-Diaminobenzophenone 611-79-0 质量规格:>95.0%(GC)(T) 单胺氧化酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格:500次
3,3'-二硝基二酮(>99.0%(GC)) 3,3'-Dinitrobenzophenone 21222-05-9 质量规格:>99.0%(GC) 蛋白激酶系列高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格:500次
2,4'-二氟二酮(>95.0%(GC)) 2,4'-Difluorobenzophenone 342-25-6 质量规格:>95.0%(GC) 细胞繁殖与毒性高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格:500次
4,4'-二氟二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Difluorobenzophenone 345-92-6 质量规格:>99.0%(GC) 荧光素酶高通量筛选荧光检测试剂盒 进口/国产 规格:
1,4-二苄氧基(>98.0%(GC)) 1,4-Dibenzoylbenzene 3016-97-5 质量规格:>98.0%(GC) 颉氨霉素溶液(Valinomycin) 进口/国产 规格:0.1毫摩尔
2,2',4,4'-四羟基二酮(>95.0%(T)) 2,2',4,4'-Tetrahydroxybenzophenone 131-55-5 质量规格:>95.0%(T) 卡那霉素溶液 进口/国产 规格:10毫克/毫升
2,4,4'-三羟基二酮(>98.0%(HPLC)(T)) 2,4,4'-Trihydroxybenzophenone 1470-79-7 质量规格:>98.0%(HPLC)(T) 四环素溶液 进口/国产 规格:10毫克/毫升
鱼类神经坏死病毒(VNN)核酸检测试剂盒Valnemulin Hydrochloride 盐酸沃尼妙林 1g 瓶
Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52 100g 瓶
Isoprenaline Hydrochloride 盐酸异丙素 5g 瓶
L-Threonine L-苏氨酸 25g 瓶
荧光素 1 g 支
BL21(DE3)感受态细胞 10×100ul 袋
11-keto-β-Boswellic acid 11-酮基香酸 17019-92-0 5mg
Coenzyme Q10 辅酶Q10-范醌 1g 瓶
Glycyrrhizic acid 甘草酸 1405-86-3 20mg
Potato Extract Powder 马铃薯浸出粉 250g 瓶
Oil Red O 油红 5g 瓶
RQ1 Rnase-Free Dnase 1000u 支
Pleiotrophin / PTN 基因全长ORF克隆
FKBP6 基因全长ORF克隆
大鼠 AQP9 基因全长ORF克隆
DPPIV 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
RGMA 基因全长ORF克隆
重组大鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (His 标签)
SHISA4 基因全长ORF克隆
CATSPER1 基因全长ORF克隆
BLNK 细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
CFL2 基因全长ORF克隆
小鼠 LGALS3BP 基因全长ORF克隆
小鼠 ZBTB16 基因全长ORF克隆