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极细密螺旋体PCR检测试剂盒注意事项

日期:2021-03-10浏览:40次

极细密螺旋体PCR检测试剂盒注意事项:

1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。

2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。

3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

4.PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。

5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。

6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。

7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

实验要点:
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。  
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。

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